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    當前位置：文庫百科 ? 文章詳情
    實時熒光定量PCR（qPCR）的實驗步驟解析
    來源： 時間：2022-12-29 09:33:40 瀏覽：11095次

    qPCR: Quantitative Real-time PCR,中文名是實時熒光定量PCR。qPCR是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環(huán)后產物總量的方法。通過內參對待測樣品中的特定DNA序列進行定量分析的方法。

    TakaRa 試劑盒PrimeScript? RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time)，SYBRGreenⅠ法。

    實驗步驟：

    一，去除基因組DNA反應：

    全波長酶標儀測出RNA濃度（單位ng/ul）;按照以下劑量配制10ul體系

    試劑使用量
    5×gDNA Eraser Buffer2 μl
    Buffer 2.0 μl gDNA Eraser1 ul
    Total RNA1ug/RNA濃度
    RNase Free dH2OUp to10 ul

    PCR程序：42℃ 2min

    4℃ ∞

    二，反轉錄反應：

    按照以下劑量配制20ul體系：

    試劑使用量
    步驟 1 的反應液10 ul
    PrimeScript RT Enzyme Mix I1 ul
    RT Primer Mi1 ul
    5×PrimeScript Buffer 2（for Real Time）4 ul
    RNase Free dH2O4 ul
    Total20 ul

    PCR程序：37℃ 15min

    85℃ 5s

    4℃ ∞

    三，Real Time PCR

    按照以下劑量配制20ul體系：

    試劑使用量
    SYBR@ Premix Ex TaqII(2X）10 ul
    F Primer(10uM)0.8 ul
    R Primer(10uM)0.8 ul
    ROX Reference II0.4 ul
    反應2的DNA模板2 ul
    ddH2O6 ul

    四，儀器設置

    儀器使用的是熒光定量PCR儀Q6-96，設置界面如下圖：

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    評論 / 文明上網理性發(fā)言
    12條評論
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    全部 3小時前 四川
    文字是人類用符號記錄表達信息以傳之久遠的方式和工具。現(xiàn)代文字大多是記錄語言的工具。人類往往先有口頭的語言后產生書面文字，很多小語種，有語言但沒有文字。文字的不同體現(xiàn)了國家和民族的書面表達的方式和思維不同。文字使人類進入有歷史記錄的文明社會。
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